肝癌治疗

　　2、 细胞免疫治疗： 　　1） LAK细胞、TIL细胞和CIK细胞 　　淋巴细胞因子激活的杀伤细胞（LAK），为IL-2在体外活化和扩增的淋巴细胞对肿瘤细胞有较强的杀伤活性，杀伤瘤谱较广，而且不损伤正常的淋巴细胞，称为淋巴因子激活的杀伤细胞。经IL-2激活后的效应LAK细胞在体内外对多种肿瘤细胞具有很强的溶解放应，通过对LAK细胞活性的观察，可以推测机体肿瘤免疫的状态，同时对指导临床免疫有重要意义[]。临床研究中应用体外活化和扩增的LAK输入病人体内的过继免疫治疗，对黑色素瘤、肾细胞癌、淋巴瘤等有一定疗效。

肝癌的生物治疗　肿瘤生物治疗技术问世以来，得到迅速发展，已成为有别于传统治疗方式的一种极具希望的抗肿瘤治疗手段。

　　近年来在自杀基因系统的基础上，提倡合并使用其他抗肝癌生物治疗方法，如联合使用细胞因子，可促进CTL细胞及NK细胞增殖，细胞毒作用增加。Kim等[4]联合应用CD/5-FC和IL-18转染人肝癌细胞株，结果肝癌周围可见大量CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润，肝肿瘤体积明显缩小，明显优于单用CD/5-FC组或IL-18组。Kwang等[5]将IL-2与HSV-TK基因联合应用于活体治疗肺癌肝转移，结果肝肿瘤完全消退。

　　我们应用肝癌细胞HepG2冻融抗原致敏DC（Hep-DC），与自体淋巴细胞共培养后，进行体外杀伤试验。结果显示Hep-DC-L对HepG2具有较强的杀伤作用，明显高于未致敏DC刺激的淋巴细胞（DC-L）和单纯淋巴细胞（L）（P<0.05），提示HepG2冻融抗原致敏的DC可诱导自体淋巴细胞产生HepG2抗原特异性CTL，对HepG2发挥高效特异的杀伤作用。 　　在此基础上，我们应用AFP-cDNA真核表达载体转染DC制备AFP-DC瘤苗，电化学发光法检测培养上清中含有AFP抗原分子，证实AFP-DC能够表达并分泌AFP，同时，细胞免疫荧光染色可见细胞膜及胞浆荧光染色阳性，表明AFP-DC不仅能够表达AFP，并且能够将AFP抗原分子提呈到细胞膜上。AFP-DC活化的CTL对表达AFP的肝癌细胞株HepG2有强的杀伤作用，与对照组相比，差异显著，表明AFP-DC活化的CTL是AFP特异性的。证实肝癌相关性抗原AFP可作为肝癌靶向治疗的突破点，AFP-DC疫苗可以成功诱导出AFP特异性CTL，对表达AFP的肝癌细胞株HepG2具有特异性杀伤效用。

　　我们以健康供者外周血单个核细胞（PBSC）为来源，在GM-CSF、TNF-a和IL-4作用下体外诱导培养出具有典型形态特征和表型的DC，诱导的DC光镜和扫描电镜下细胞周围可见毛刺状突起和树枝状突起，透射电镜下细胞表面不规则，可见各级突起，胞内可见溶酶体、线粒体，粗面内质网发达；DC特征性表型CD1a、CD11c表达量分别为47.7%、78.49%，MHC分子HLA-DR和共刺激分子CD80、CD86表达量分别为66.09%、51.37%、55.83%。

　我们采用基因重组技术构建了用乙肝病毒表面抗原“a”位点基因替换CD74分子的CLIP片段基因的真核表达质粒，希望通过恒定链分子的引导肽将该抗原引导到MVB中，从而进入外来体的形成通路，最终将目的抗原负载到外来体。同时我们利用外来体的直径是50~90 nm的物理特性，采用用基于孔径的生物膜分离技术成功地制备了外来体。希望能采用外来体提取肝癌等肿瘤抗原，解决肝癌生物治疗中特异性肿瘤抗原来源困难的问题 　　生物肝癌治疗法日新月异，随着现代基础医学的不断进步，新的治疗方法和手段层出不穷，我们相信其治疗效果将会得到极大改善，在临床应用中挽救更多的生命。