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(1)灵芝培养基的制备与菌种的分离
①母种培养基配方及制备
母种培养基 多采用马铃薯一琼脂(PDA)培养基,其配方:马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,琼脂20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,维生素B11~2片,水l000毫升。
制备方法 按常规方法进行。培养基制成后,调节pH值4~6,分装试管,高压灭菌30分钟,稍冷却后摆成斜面培养基。
②灵芝纯菌种的分离 常用有组织分离法和孢子分离法两种。
组织分离法 在无菌的条件下,选取新鲜、成熟的灵芝,于菌盖或菌柄内部切取一小块黄豆大小的组织块,接种在斜面培养基上。置温度24~26℃下培养7~10天;当白色菌丝布满斜面时,即得母种,然后再扩大培养成原种和栽培种。
孢子分离法 在无菌的条件下,取新鲜成熟的灵芝菌,于马铃薯培养基上培养一段时间,温度控制在24~26℃左右,培养基表面上便形成与子实体(小灵芝)相似物,在贴近管壁处形成菌管,自菌管管口中散发出孢子粉,便是纯孢子粉,将此孢子粉接种到培养基上获得一层薄薄的菌苔状的营养菌丝,即得灵芝纯菌种。
(2)人工栽培方法 目前多采用瓶栽和段木培养两种方法。
①灵芝瓶栽法
培养料配方 棉子壳80%,麸皮16%,蔗糖1%,生石膏3%。加水适量,混拌均匀,使培养料含水量在60%~70%左右,以手握之不出水为度,调节pH值5~6。
装瓶灭菌 料拌均匀后,先闷l小时,然后装入广口瓶中,装料要上紧下松,装量距瓶口3~5厘米即可。装好后用尖圆木棒打一通气孔,擦净瓶体,用塑料薄膜加牛皮纸扎紧瓶口,然后进行灭菌(高压灭菌,压力1.1千克/每平方厘米,时间1.5小时;常压灭菌100℃,保持8~10小时,再闷12小时)。
接种 在无菌室内进行。用75%的酒精消毒接种工具,然后用右手拿接种耙在酒精灯火焰上灭菌,左手拿菌种瓶,并打开菌种瓶口,在火焰旁用接种耙取出一块小枣大小的菌种,迅速放人栽培料瓶中,经火焰烧口,用牛皮纸包扎好,置于培养室内培养。
培养与管理 在温度20~26℃,空气相对湿度在60%以下,约培养20~30天,菌丝即可长满全瓶;再继续培养,培养料上就会长出l厘米大小的白色疙瘩或突起物,即为子实体原基??芝蕾。当芝蕾长到接近瓶塞时,拔掉瓶口棉塞,让其向瓶外生长,这时,控制室温在26~28℃,空气相对湿度在90%~95%,保持空气新鲜,给以散射光等条件,突起物芝蕾向上伸长成菌柄,菌柄上再长出菌盖,孢子可从菌盖中散发出来。从接种到长出菌盖,约需2个月时间。生长期要注意管理,每天要通过定时开窗的办法换气,如在气温偏高时,上、下午都要开窗。
②灵芝段木培养法
段木的选择 应选用栎、栗、柞、桃、柳、杨、刺槐等阔叶树作段木。直径5~15厘米均可选用。锯成l米长的段木,不要削皮,码堆干燥。
接种 选择培养20天左右子实体原基刚形成的新鲜菌种。这种菌种生命力强,接入段木后发育快,且不怕杂菌污染。接种工具可用直径1~1.2厘米的打孔器或电钻头。打入段约l厘米深,行株距20厘米×20厘米,呈品字形排列。打孔后立即接种。接种前先将菌种取出,截成l平方厘米的水块,轻轻塞入孔穴中,稍压紧后盖上树皮。30天后,菌丝便浸入段木,并可见孔穴四周形成棕色菌圈,说明接种成功。立即将段木埋入pH值5~6的酸性土壤中,若天气干旱,可淋水湿润土壤。遇雨季或雨天,要注意排水。此外,还要在栽培场周围撒一圈拌有灭蚁灵的毒土,诱杀白蚁,防止危害段木。第二年清明节后,当气温升至25℃左右,可取出数根段木检查:揭开树皮盖,见孔穴周围已长成茶褐色,或已长出芝蕾;段木两端有白色菌丝或浅褐色菌膜,并可嗅到灵芝菌丝的特殊气味,显示菌丝已成熟。立即将段木挖出,截成长17~22厘米的小段木,然后,将其斜埋入酸性含砂砾的土壤中,上端露出地面约3厘米,且覆盖杂草遮荫,隔数日洒一次水,保持土壤湿润,经7~l0天开始长出芝蕾。在生长芝蕾期,栽培场要保持90%的相对湿度,约2个月左右芝蕾长成灵芝成品,即可采收。