唇腭裂的等位基因

唇腭裂的致病因素包括基因因素和环境因素。而基因表达的调控可以在转录、转录后修饰、翻译和翻译后修饰各个水平上进行调控。环境条件影响基因效应，也是通过形成一定的细胞内外环境，通过受体和配体活性的改变，影响细胞的信号转导通路或直接形成基因突变来调控腭突的发育。家系分析已证实烟、酒与某些药物能显著增加个体唇腭裂畸形的发病风险。Maestri等［5］分层分析受累患者唇腭裂的类型、人种、家族史和母亲孕期吸烟与可能易感性基因的交互作用，证实阳性家族史与D2s443标记TGFα等位基因4的交互作用呈显著性相关；母亲孕期吸烟与D2s443标记TGFα等位基因4的交互作用的统计值P＝0.06，虽不呈显著性相关，但也有一定的意义；母亲孕期吸烟与D14s61标记TGFβ3等位基因6的交互作用呈显著性相关；以及高加索人群与D19s178标记BCL3等位基因13和THRA1标记RARA等位基因8的交互作用呈显著性相关。Hwang等［18］证实CL／P患者与CL/P阳性家族史呈显著性相关；CPO患者与CL/P或CPO阳性家族史以及其他家族性出生缺陷史呈显著性相关；母亲孕期吸烟与TGFαTaqIc2等位基因交互作用呈显著性相关（其中分两组：阳性家族史患者和非阳性家族史患者）；同时TGFαTaqIc2等位基因和母亲孕期吸烟的CPO患者呈显著性相关，而TGFTaqIc2与CPO患者（包括母亲孕期吸烟和孕期不吸烟的CPO患者）呈非显著性相关，提示TGFα可能调节组织对环境影响的易感性。Lidral等［1］证实TGFα TaqI等位基因与阳性家族史呈显著性相关，有无阳性家族史影响统计分析的结果。目前国内外广泛应用的化学药物诱导鼠腭裂模型是通过化学药物调控基因表达，以细胞因子、受体和信号转导通路的变化来调控腭突的发育，诱导腭裂的形成，也是基因与环境交互作用的体现。同时基因之间也相互作用，Maria等［19］的EGFR无效表达的基因敲除动物模型，证实在不同的基因背景下其表现型不同以及EGFR调控细胞的增生和分化作用，但需要进一步研究EGFR在胚胎期唇腭裂形成中的作用。
　　　　2　基因与环境的交互作用
　　　　1.3　另一种研究方法为体外培养实验研究，有腭细胞培养、腭器官培养和全胚胎培养。腭突中嵴上皮细胞(MEE)和腭间充质细胞(EPM)的研究多采用腭器官培养的手段［14］。Potchinsky等［15］的EPM细胞体外培养实验研究证实了有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)调节EGF对细胞的效应，证实了环腺苷酸(cAMP)和TGFβ信号转导通路调节EGF对细胞的增生作用，以及多条信号转导链调控EPM细胞的增生反应，MAPK不调控EGF对细胞的增生作用，可能调控EPM细胞的其他过程。Hehn等［16］的鹑卵全外培养实验提示MAPK在鹑的继发腭的形成中与细胞因子调控的细胞增生有关。Nugent等［17］通过EPM细胞体外培养实验研究证实RA和RA诱导的TGFβ在腭细胞增生和葡萄胺聚糖(GAG)形成中的调控作用，提示TGFβ在RA诱导腭裂畸形的形成中有重要作用。
　　　　1.2　随着转基因技术和基因敲除技术的完善和发展，人们将外源性基因转移至动物体内，使之在特定组织和器官特异性表达，以及在发育过程中特定时间上表达以研究基因功能和基因表达在转录、转录后、翻译和翻译后等不同水平上的调控机制，而基于基因同组原理的基因打靶技术的出现使基因敲除动物模型的建立成为可能，并使之在特定组织器官上表达而不影响其他组织器官。Sandgren等［9］和Jhappan等［10］的TGFα过度表达转基因动物实验不支持TGFα等位基因在唇腭裂形成中的作用。Umbach等［11］的Sek4和Nuk基因的无效表达动物实验证实了Sek4和Nuk受体在面部发育中有重要作用并且互相协作共同影响面部的发育。Damm等［12］的转基因小鼠动物实验证实RA受体畸变抑制了转录过程，诱导形成转基因小鼠腭裂，影响面部发育，同时进一步研究了RA的基因表达调控机制。Condie等［13］的Gad67基因突变小鼠动物实验证实了Y-氨基丁酸(GABA)在小鼠腭正常发育中有重要作用。
　　　　另外，Beiraghis等研究一个五代家系证实染色体4q上的D4s175标记附近和D4s192标记附近有等位基因与NSCL/P呈显著性相关，该基因可能为NSCL/P的主要致病基因，而染色体6上无与NSCL/P相关的可能易感性基因。
　　　　1.1.6　RARA等位基因　Maestri等证实THRA标记RARA等位基因8与CL/P患者呈显著性相关。
　　　　1.1.5　DXL2唇腭裂的等位基因　Lidral等证实DXL2等位基因与CL/P患者的连锁不平衡统计分析结果无显著性意义，同时对DXL2等位基因进行突变部位查询，未发现有基因突变。
　　　　1.1.4　MSX1等位基因　Lidral等证实MSX1等位基因与CL/P患者的连锁不平衡统计分析结果有显著性意义，同时对MSX1等位基因进行突变部位查询，未发现普遍性突变，但在MSX1等位基因上发现了可以改变基因正常功能的几种罕见突变。
　　　　1.1.3　BCL3唇腭裂的等位基因　Maestri等证实BCL3标记BCL3等位基因3与CL/P患者和CPO患者呈显著性相关，D19s178标记BCL3等位基因8和等位基因13与CLP患者呈显著性相关。Lidral等证实BCL3等位基因与CL/P患者和CPO患者的连锁不平衡的统计分析结果无显著性意义。
　　　　1.1.2　TGFβ3唇腭裂的等位基因　Lidral等证实TGFβ3等位基因与CL/P患者的连锁不平衡统计分析结果有显著性意义，同时对TGFβ3等位基因进行突变部位查询，未发现普遍性突变，但在TGFβ3等位基因发现了可以改变基因正常功能的几种罕见突变。Maestri等证实D14s61标记TGFβ3等位基因6与CL/P患者和CPO患者呈显著性相关。
　　　　1.1.1　TGFα唇腭裂的等位基因　Maestri等证实D2s443标记TGFα等位基因4与唇裂伴发腭裂(CLP)患者呈显著性相关。Lidral等证实TGFα等位基因除与有阳性家族史的CL/P患者呈显著性相关以外，与CPO和CL/P患者的连锁不平衡无显著性意义。Wyszynski等证实染色体2q13上的D2s443标记TGFα等位基因与NSCL/P呈非显著性相关。Shiang等在提取样本DNA进行PCR扩增后，分割扩增产物为DNA片段，以TGFα标记探针进行限制性片段长度多态性分析(RFLP)，证实TGFα与CPO患者呈显著性相关，以及进行DNA片段的测序证实了TGFα等位基因的突变部位。
　　　　1.1　筛选研究对象，采集实验标本，文献报道可采集血样本和组织样本(颊粘膜组织)进行实验研究［1，5，6］。先提取样本的DNA，选择特定基因标记引物进行PCR扩增，然后检测PCR扩增产物。筛选出的可能的易感性基因包括TGFα、TGFβ、BCL3、MSX1、DLX2、RARA基因等［1，4～8］。
1　实验研究和动物模型