赤芍、甘草等中药合剂治急性荨麻疹机理的实验研究

　　我们在临床上应用抗敏口服液治疗急性荨麻疹，取得了较好疗效。为进一步探讨其治疗 机理，我们做了细胞因子的实验。通过以上分析，我们可以得知，抗敏口服液可以通过 调整细胞因子来治疗荨麻疹，这为治疗过敏性疾病提供了一条有效的途径。

　　荨麻疹患者由于il－2水平下降，使il－2对il－4促进b细胞合成ige的抑制作用被减弱，使 ige合成增强。经抗敏口服液治疗后荨麻疹患者il－2趋于正常，治疗前后比较，差异有显 著性，治疗后与正常人比较差异无显著性（p＞0.05），说明抗敏口服液的治疗机理之一 是升高il－2。这也解释了临床上服抗敏口服液患者一般情况改善，抵抗力增加的问题。

　　il－2系t淋巴细胞活化过程中由细胞膜所分泌的一种糖蛋白，具有促进t细胞、b细胞、 nk细胞增生、分化、增强效应，细胞活化，诱导干扰素产生及免疫调节等多种功能。同 时也是t细胞活化标志之一。ben?sasson[1]等认为t淋巴细胞产生il－4需要il－2，il－2可 上调il－4诱导ige合成。但相反的报道[2]认为il－2能抑制正常人和过敏患者外周血单一核细胞，由il－4诱导ige合成。我们的研究 表明荨麻疹患者发作期血清il－2水平显著低于正常人对照组（p＜0.01）。

　　il－4含量显著高于正常对照组，经抗敏口服液治疗后il－4含量明显下降，而与正常人组 比较，差异无显著性，说明抗敏口服液可能是通过降低il－4来治疗荨麻疹患者。

　　从肥大细胞实验中，我们可以发现抗敏口服液对肥大细胞脱颗粒有明显的抑制作用。被 动皮肤过敏反应实验提示，抗敏口服液无论与其拆方或空白组相比，其对抗原抗体的结 合都有明显抑制作用。因此，其具有明显的抗ⅰ型变态反应的作用，并且随着时间的延 长，作用加强。实验室检测方面：检测结果发现荨麻疹患者

　　讨论

　 例数 il-2 il-4
急性荨麻诊组 20 　 　
治疗前 　 173.3±49.7 98.8±13.0
治疗后 　 519±14.2 32.7±8.9
正常人 20 520±149 34.3±8.6

表2 急性荨麻疹患者用抗敏2口服液治疗前后il-2、il-4水平比较

组别 喂药天数 q值 p值
6d 7d 8d 9d 10d
抗每组 22 19 14 11 11 - -
赤芍组 80 88 71 70 72 3.67 ＜0.01
地龙组 86 83 80 79 72 4.55 ＜0.01
甘草组 76 74 71 76 71 3.93 ＜0.01
赤芍+甘草组 72 70 70 70 67 3.11 ＜0.01
赤芍+甘草+地龙组 51 54 59 50 36 1.04 ＜0.01
空白组 88 75 91 91 93 5.43 ＜0.01

表1 药物对肥大细胞脱颗粒数的影响

　　检测结果见表2。治疗前，荨麻疹患者与健康人比较il－2明显降低，il－4明显升高，p均 ＜0.01。经抗敏口服液治疗后荨麻疹患者il－2、il－4趋于正常，与正常人比较，p＞0.05。 治疗前后比较，差异均有显著性(p＜0.05)。

　　二、临床试验

　　2.被动皮肤过敏实验：抗敏组的a值最小为0.08±0.04，显著低于赤芍组(0.32±0.09)、地龙 组(0.21±0.14)、甘草组(0.25±0.16)、赤芍＋甘草组(0.24±0.02)、赤芍＋甘草＋地龙组(0.28± 0.08)及空白组(0.48±0.06),经t检验，p均＜0.01。

　　1.各组肥大细胞脱颗粒百分数：从表1可见，抗敏组的肥大细胞脱颗粒百分数与其它各组 相比最小，空白组与其它各组相比最大，其它各组也较高，各组与抗敏组比较，差异均 有显著性（p＜0.01），说明抗敏口服液可以有效抑制肥大细胞脱颗粒。

　　一、肥大细胞脱颗粒实验

　　结果

　　3.实验室检测：急性荨麻疹患者口服抗敏口服液10ml，日3次，共治疗7d。于治疗前后各 取患者血清，采用双抗体夹心elisa法检测il－2及il－4，elisa药盒购自深圳晶美生物有 限公司。首先分别将标准品il－2稀释为1000、500、250、125、62.5、0pg/ml，il－4稀释为 375、187.5、93.75、46.88、23.44、0pg/ml，分别将稀释后的标准品及标本加入已用抗体il－ 2，il－4单抗预包被的聚苯乙烯反应小孔内，每孔100μl，用封板胶纸封住反应孔，37 ℃，90min，用pbs洗5次，每孔加生物素标记二抗100μl，封住板孔，37℃，60min。pbs洗 板5次，再加稀释好的酶联物100μl，封住板孔，37℃，30min。pbs洗板5次，每孔加底物 a、b各50μl，或1滴，避光37℃，15min。每孔加终止液50μl或1滴混匀，即刻用bio－ rad公司生产的酶标仪在波长450nm处测其吸光度a值，用直线回归分析，求出其标准方程 ，计算待检血清中il－2、il－4的含量，单位为pg/ml。

　　2.被动皮肤过敏反应试验：抗血清的制备：取4只未用药（200±30）g大白鼠，将上述天 花粉氢氧化铝凝胶混悬液脚掌注射，每个脚掌注射0.1ml，每只大白鼠0.4ml，15d后，断 头取血离心得抗血清。将上述取得的抗血清稀释10倍。另取上述用药各组大白鼠8只，剪 去背部的毛，选2点，每点皮内注射上述抗血清0.1ml，48h后进行抗原攻击，尾静脉注射 天花粉10mg/kg，天花粉用1％伊文思蓝溶液配成1mg/kg。20min后断头处死动物，翻转背部 皮肤，将蓝色反应斑皮片剪下，剪碎加入丙酮－生理盐水（7∶3）混合溶液6ml浸泡， 次日过滤并离心，在波长610nm处测吸光度a值。

　　1.肥大细胞脱颗粒实验：取上述未用药大白鼠6只，断头取血并收集血清。随机将大白鼠 分为抗敏组、赤芍组、地龙组、甘草组、赤芍＋甘草组、赤芍＋甘草＋地龙组、空白组 。每组10只，按5ml/kg，每日1次于晨 8时灌胃，分别于第6、7、8、9、10天每组各取2只，腹腔按10ml/kg注射上述天花粉氢氧化 铝凝胶，20min后，右腹腔内注射上述hanks液（注射前加热）15～20ml，轻揉腹部2min后 ，脱颈椎处死大鼠，打开腹腔，用毛细吸管收集腹腔液（富含肥大细胞）于离心管中， 2000r/min离心15min，弃上清液用含大白鼠血清的hanks液洗涤1次，离心弃上清液，加入含 25％大白鼠血清的hanks液洗涤1次，离心弃上清液，加入含25％大白鼠血清的hanks液1 ml混匀，制成肥大细胞悬液观察。取制备的肥大细胞悬液1滴于载玻片上，盖上涂有中 性红染液的盖片，在高倍显微镜下观察，正常肥大细胞为正圆形，边缘整齐；脱颗粒的 肥大细胞边缘不整齐或细胞破裂，有颗粒自细胞浆溢出，随机计数100个细胞，计数脱颗 粒细胞数及脱颗粒百分数。电镜观察，取大白鼠的小肠系膜，用2.5％戊二醛预固定2h， 磷酸盐缓冲液漂洗3次，1％四氧化二锇固定1h，丙酮梯度脱水。epon－618环氧树脂包埋 ，超薄切片机切片，jeol－10esx透射电镜观察，加速电压80kv，放大倍数8000倍。