免疫损伤

    1.5.2  PT测定，自动凝血仪(比浊法)，直接报告PT(±s)，同时加做正常对照。

    1.2  实验动物及肝纤维化模型制作  健康Wister大鼠40只，5月龄，雌雄各半，体重214.    7±25g，北京医科大学动物养殖中心提供。饲养观察1周后用于实验。按性别进行区组设计，随机分为正常对照组、模型组（实验对照组）、高剂量治疗组、低剂量治疗组，每组10只（雌雄各半）。除正常对照组外，每周给其他3组大鼠腹腔注射猪血清2次，每次0.    5ml/只，连续8周。制成肝纤维化模型。

    模型组肝细胞肿胀，胞质内出现大量空泡，小叶内和小叶间、汇管区等间质细胞成分和纤维成分明显增高，肝细胞核变形或稍固缩，细胞边界不清楚，胞质不均匀或大空泡（图2）。Mallory染色时，可见大量蓝绿色粗大的胶原纤维束，呈放射状插入肝小叶，将肝脏分割成以汇管区为中心的假小叶。经彩色图象分析仪统计，可见肝内胶原纤维面密度明显高与其他组（表3）。治疗后大剂量组肝细胞内空泡减少，纤维成分减少；而小剂量组纤维成分较少不明显（图3、4）。

    3  讨论

    2.2  肝功能改变

    1.1.2  自动血凝仪及相关试剂，用于PT测定。

    3.1  猪血清诱发大鼠免疫损伤性肝纤维化的机理，主要是血清引起机体产生可溶性免疫复合物，激活补体。由于肝细胞表面存在Fc受体，可与免疫复合物结合而沉积于细胞膜，导致肝细胞损伤并激发肝细胞、贮脂细胞和成纤维细胞增生，表现为Ⅲ型变态反应。本模型与临床乙型肝炎病毒引起的慢性活动性肝炎和肝硬化与自身免疫应答及免疫调节功能紊乱有相似性，故对指导临床研究有很重要价值。

    1.6  形态学检查  快速处死动物，肝脏多部位取材，液体石蜡包埋，制备冰冻切片，分别进行HE、Mallory和免疫组化染色，光学显微镜观察肝小叶结构和胶原纤维密度，用网格计数器计数吞噬细胞和储脂细胞密度。

    2.3  形态学观察(HE和Mallory染色)   正常组大鼠肝脏中以肝细胞为主，结缔组织和间质细胞较少，因此肝小叶分界不明显，肝小叶间汇管区可见小叶间A、V和胆管，其中结缔组织和纤维成分较少；胶原纤维成分也很少。肝细胞为多边形，边界可见，胞质弱嗜酸性，均匀一致，胞核呈圆形，1～2个，嗜碱性（图1）。

    2.2.2  治疗前后大鼠凝血酶原时间的变化（表2），各组均与模型组（实验对照组）比较 。表2  各组大鼠凝血酶原时间（PT）测定结果注：各组均与实验对照组比较表2显示：血浆凝血酶原时间（PT），实验对照组较治疗组明显延长，差异极为显著（P<0.    0005）。

    3.3  祖国医学著作（失血大法）阐述：“失血一症，大抵由于肝不藏血，脾不统血”；缪仲醇《先醒斋医学广笔记·吐血篇》云“吐血者，肝失其职也”；近代周炳麟认为：“血症之患，肝脏首当其冲”，可见肝、脾与血症的密切关系。肝藏血功能指肝有贮存血液、调节血量和化生血液的作用。血浆蛋白不仅是构成血液的主要成分，并且对维持渗透压、保持凝血-抗凝和纤溶的动态平衡起着重要的作用。肝不藏血之说虽不能等同于肝病出血，但包括在其范围之内，各种致病因素损及肝脏，将会使肝藏血、化生血液成分的功能受到影响，表现为蛋白质合成减少和凝血、抗凝及纤溶障碍。从而导致出血或血栓形成。

    2.1  一般状况观察  肝损伤大鼠在实验初期毛发光亮、一般状态良好。与正常对照组大鼠相比，饮食、饮水无异常变化，4～7周后，实验组较对照组体重增长缓慢，8～11周治疗期间体重增长较快，且大剂量组明显优于小剂量组。