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(2)钼酸铵(钠)-浓硫酸溶液(Frobde 试剂):为1%钼酸铵或钼酸钠的浓硫酸溶液。该试剂能与可待因显黄色,与小檗碱显棕绿色,与乌头碱显黄棕色,与阿托品及士的宁不显色。在使用时应注意,该试剂与蛋白质也能显色。
(3)甲醛-浓硫酸试剂(Marquis试剂):为30%甲醛溶液0.2ml与浓硫酸10ml的混合液。该试剂能与可待因显蓝色,与吗啡显紫红色,与咖啡碱不显色。
(4)浓硫酸:该试剂能与乌头碱显紫色,与小檗碱显绿色,与阿托品不显色。
(5)浓硝酸:该试剂能与小檗碱显棕红色,与秋水仙碱显蓝色,与乌头碱显红棕色,与咖啡碱不显色。
(三)含量测定:
欲测定生药中的生物碱含量,首先应将其从植物组织中定量的分离出来,精制后选择合适的方法进行测定。
1. 生物碱的提取。
2. 生物碱试样的精制。
3. 生物碱的定量分析:生物碱的定量分析方法大多是根据它含有的N原子或双键或分子中官能团理化性质而设计的。如:重量法测定总碱是根据游离生物碱和生物碱盐在水和水不相溶的有溶剂中溶解度的不同而设计的,也可以利用与沉淀试剂发生反应形成不溶性盐来进行设计。容量法则是利用N原子的碱性在水介质中进行的中和滴定,又因为大多数生物碱在酸性溶液中可与某些重金属络盐定量发生沉淀,沉淀中金属或剩余试剂中的金属,经适当处理后,按络量法测定。比色法测定总碱含量是最重要的方法之一,它是根据生物碱的颜色、官能团与特定试剂发生反应产生的颜色,或生物碱与酸性染料在一定条件所成的复合物颜色等,按比色法完成总碱的测定的。另外大多数生物碱分子结构中含有双键,在紫外区有吸收,因此,可按紫外分光光度法于特定波长处测定吸收系数相近的总碱含量。同理,有荧光的生物碱也可用荧光分光光度法测定。以上均属测定总碱的方法,但测定指定成分的含量,就有一定的困难。目前,多采用薄层或柱层进行预分离,取待测组份按比色法、分光光度法(包括可见、紫外、荧光)测定,也可直接在薄层板上按上述方法测定。挥发性生物碱组分最好用GC方法或HPLC方法,当然,HPLC方法可以测定几乎所有类型的生物碱的量。
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