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杭白芷的多倍体诱导与培育
注意阅读时间，健康用眼！ 2013-06-13 中医诊疗网 www.zlnow.com
白芷为伞形科植物，其根具有祛风、燥湿、消肿、止痛功效，是常用中药。为了提高药材产量，改善品质，笔者从1996年开始对杭白芷Angelica dahurica(Fiseh．ex Hoffm．)Benth．et Hook．f．vat．formosana(Boiss)Shan et Yuan进行了人工诱导多倍体的实验研究，诱导效果虽然明显，但多倍体试管小苗诱导生根难度较大。因此作者改用对花序进行诱变的方法，获得了成功。
1材料
杭白芷A．dahurica vat．frmosana来源于湖南省著名白芷产区茶陵县，经彭菲教授鉴定核实。
2方法与结果
2．1溶液配制：配制0．05％，0．08％，0．1％，0．15％，0．2％5个浓度的秋水仙水溶液，于5月上旬花序总苞刚刚张开的时候，分别用上述溶液将脱脂棉浸湿后，覆盖在花序苞上，并用透气薄膜疏松包裹。起止时间为上午8：30至次日上午8：30，共计处理24 h，在处理时间内，保持脱脂棉湿润。同期设对照株，用水打湿棉花，覆盖在花序苞上，保湿24 h。 2．2花苞观察：7月上旬观察，经各种浓度秋水仙液处理的花序苞均出现花序总轴增粗和各花序间距缩短、总苞变厚等变化，进一步观察还发现，结实率也出现下降，但籽粒较饱满、个大。随着处理液浓度增加，上述变化更加明显，其中经 0．2％秋水仙液处理的已不结实，花序总轴几乎不延长。而对照株结实虽然较多，但瘪粒也较多，饱满的籽粒也不及处理株的大。
2．3种籽干粒重：7月中旬种籽成熟时分别收取种籽，自然晾干后称量种籽千粒重，分别任选500粒，去除杂质，电子天平称重，结果如下。
秋水仙液0．05％的处理：种籽千粒重1．257g×2= 2．5 1 g；0．08％的处理：种籽千粒重1．652g×2=3．30g； 0．1％的处理：种籽千粒重1．547 g×2=3．09 g；0．15％的处理：种籽千粒重0．91 88g×2=l．84g；对照：1．176g×2= 2．35 g。
其中秋水仙液浓度为0．08％的处理株其种籽个大、饱满，千粒重比对照明显增加。确定此处理为观察目标，舍弃其他处理的种籽，进行下一步实验。
2.4发芽情况：9月底将种子用清水浸泡12 h后播于花钵中，观察发芽情况，结果发现，处理株的种子发芽快(比对照提前8 d左右)，发芽率明显提高，达90％左右(对照为50％左右)，且出芽整齐(对照出芽前后会相差20 d)。对已发芽的种子进行常规染色体压片镜检，预处理液浸泡时间为14：00～18：00(此预处理时间经多次实验确定，所以分裂相较多)，可观察到绝大多数细胞中染色体数目增多了，为44条 (对照为22条)。
2.5小苗生长情况：小苗越冬至次年2月，观察小苗生长情况，发现凡是处理株得来的种子其小苗确实比对照的明显粗壮些，表现叶柄粗而长、叶片大(当日测量：处理的叶柄长 4～8 cm，对照的叶柄长2．5~3cm)，将以上小苗去钵带土移载人田中，移栽后浇水。3月上旬，观察可见处理株显粗壮，叶色深绿，叶片增厚。撕取叶下表皮，于显微镜下观察，与对照比较，其气孔明显增大(显微测量：处理的气孔长×宽为 76 μm×57 μm，对照的气孔长×宽为57 pan×49 μm)。 2·6每株鲜重：8月中旬，挖取地下根部药材，洗净，晾干。称量鲜重，处理株平均鲜重每支38．8 g，对照株平均鲜重每支29．2 g。但由于移栽，药材出现了分支，同时还可见有瘤体(根结线虫病)出现，而处理株瘤体相对较少，显示出具有一定的抗病力。
2.7欧前胡素的测定：将药材烘干，粉碎，过40目筛，采用 HPLC法对白芷中的主要药用成分—欧前胡素进行含量测定。结果处理株欧前胡素含量达到了0．460％，而对照株仅为O．261％。
3讨论
经对白芷的多倍体诱导采取了多种途径，如处理发芽种子的根尖、小苗的顶芽、植株的腋芽等，处理后观察，均有不同程度的变化，如加粗、矮壮、叶色深绿、叶片变厚等，但最终死亡或恢复原植物性状，均不可取；处理试管中愈伤组织分化的丛生芽效果明显，是一条值得进一步研究和借鉴的路子，但最终由于生根量少而无法移栽成活。所以，白芷的多倍体诱导最成功的方法为处理花序苞。
育种工作周期较长，对于后代的稳定性，笔者仍在做进一步的观察。
1材料
杭白芷A．dahurica vat．frmosana来源于湖南省著名白芷产区茶陵县，经彭菲教授鉴定核实。
2方法与结果
2．1溶液配制：配制0．05％，0．08％，0．1％，0．15％，0．2％5个浓度的秋水仙水溶液，于5月上旬花序总苞刚刚张开的时候，分别用上述溶液将脱脂棉浸湿后，覆盖在花序苞上，并用透气薄膜疏松包裹。起止时间为上午8：30至次日上午8：30，共计处理24 h，在处理时间内，保持脱脂棉湿润。同期设对照株，用水打湿棉花，覆盖在花序苞上，保湿24 h。 2．2花苞观察：7月上旬观察，经各种浓度秋水仙液处理的花序苞均出现花序总轴增粗和各花序间距缩短、总苞变厚等变化，进一步观察还发现，结实率也出现下降，但籽粒较饱满、个大。随着处理液浓度增加，上述变化更加明显，其中经 0．2％秋水仙液处理的已不结实，花序总轴几乎不延长。而对照株结实虽然较多，但瘪粒也较多，饱满的籽粒也不及处理株的大。
2．3种籽干粒重：7月中旬种籽成熟时分别收取种籽，自然晾干后称量种籽千粒重，分别任选500粒，去除杂质，电子天平称重，结果如下。
秋水仙液0．05％的处理：种籽千粒重1．257g×2= 2．5 1 g；0．08％的处理：种籽千粒重1．652g×2=3．30g； 0．1％的处理：种籽千粒重1．547 g×2=3．09 g；0．15％的处理：种籽千粒重0．91 88g×2=l．84g；对照：1．176g×2= 2．35 g。
其中秋水仙液浓度为0．08％的处理株其种籽个大、饱满，千粒重比对照明显增加。确定此处理为观察目标，舍弃其他处理的种籽，进行下一步实验。
2.4发芽情况：9月底将种子用清水浸泡12 h后播于花钵中，观察发芽情况，结果发现，处理株的种子发芽快(比对照提前8 d左右)，发芽率明显提高，达90％左右(对照为50％左右)，且出芽整齐(对照出芽前后会相差20 d)。对已发芽的种子进行常规染色体压片镜检，预处理液浸泡时间为14：00～18：00(此预处理时间经多次实验确定，所以分裂相较多)，可观察到绝大多数细胞中染色体数目增多了，为44条 (对照为22条)。
2.5小苗生长情况：小苗越冬至次年2月，观察小苗生长情况，发现凡是处理株得来的种子其小苗确实比对照的明显粗壮些，表现叶柄粗而长、叶片大(当日测量：处理的叶柄长 4～8 cm，对照的叶柄长2．5~3cm)，将以上小苗去钵带土移载人田中，移栽后浇水。3月上旬，观察可见处理株显粗壮，叶色深绿，叶片增厚。撕取叶下表皮，于显微镜下观察，与对照比较，其气孔明显增大(显微测量：处理的气孔长×宽为 76 μm×57 μm，对照的气孔长×宽为57 pan×49 μm)。 2·6每株鲜重：8月中旬，挖取地下根部药材，洗净，晾干。称量鲜重，处理株平均鲜重每支38．8 g，对照株平均鲜重每支29．2 g。但由于移栽，药材出现了分支，同时还可见有瘤体(根结线虫病)出现，而处理株瘤体相对较少，显示出具有一定的抗病力。
2.7欧前胡素的测定：将药材烘干，粉碎，过40目筛，采用 HPLC法对白芷中的主要药用成分—欧前胡素进行含量测定。结果处理株欧前胡素含量达到了0．460％，而对照株仅为O．261％。
3讨论
经对白芷的多倍体诱导采取了多种途径，如处理发芽种子的根尖、小苗的顶芽、植株的腋芽等，处理后观察，均有不同程度的变化，如加粗、矮壮、叶色深绿、叶片变厚等，但最终死亡或恢复原植物性状，均不可取；处理试管中愈伤组织分化的丛生芽效果明显，是一条值得进一步研究和借鉴的路子，但最终由于生根量少而无法移栽成活。所以，白芷的多倍体诱导最成功的方法为处理花序苞。
育种工作周期较长，对于后代的稳定性，笔者仍在做进一步的观察。
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