地中海贫血血红蛋白

评估的结果令人鼓舞，HLC-723G7仪的两种血红蛋白病筛查模式，除了具有与产品介绍中所显示的低CV值，高抗干扰性特点外，还具有临床诊断检测要求的85%以上的标本检测添加回收率。并且，地贫模式具有临床诊断α地贫和β的高符合率。以临床诊断为准，HLC-723G7仪α地贫和β地贫的诊断符合率分别为90.3%和95.2%。采用 ICSH推荐的PCR/SSCP-PAGE电泳做地中海贫血的诊断金标准，以常用的可检出β地贫的95%以上常见基因改变A 、C 、E三对引物和可检出α地贫的90%以上常见基因改变的α-1、α-N、α-M三个引物，对临床诊断和HLC-723G7仪筛查诊断的地中海贫血标本进行分子诊断。研究发现HLC-723G7筛查诊断与分子诊断符合率较高，其中α地贫诊断符合率达92.5%，β地贫符合率为81.5%，尽而更增加了HLC-723G7仪变异血红蛋白模式对三例异常血红蛋白病（HbD1例，HbE2例）的筛查也得到了凝胶电泳的证实；对一例不属HLC-723G7仪变异血红蛋白模式筛查的异常血红蛋白，也给出了不明蛋白的警告，经电泳和分子诊断为HbC病。虽然这些病例太少，但HLC-723G7仪的准确捕捉能力和对不明蛋白的提示功能，必将对HLC-723G7仪在宜昌血红蛋白筛查上，为自己争得一个有价值的地位。作为ICSH推荐的筛选诊断血红蛋白病的参比方法——HPLC离子交换层析法，TOSOH的HLC-723G7是阳离子交换层析，具有自动快速分析血红蛋白的能力。尤其对HbF和HbA2稳定准确地分析，弥补了国内进行抗碱血红蛋白测定和醋纤薄膜洗脱比色测定的缺陷，为地中海贫血的快速筛查诊断提供了十分可靠的方法。

　　试验对地中海频学和变异血红蛋白两种检测模式，在 HLC-723G7仪上分别进行针对HbF/HbA2和HbA1c的批内/批间重复性、稀释度、共存物、添加回收率等测试。对筛查出疑为地中海贫血的标本中HbA2值高于公认成人HbA2参考值上限（>5.5%）的认为是HLC-723G7筛查出的β地中海贫血：对HbA2明显降低的（≤2.5%）认为可疑 α地中海贫血。对上述三种情形分别与流行病学资料、醋纤薄膜电泳、抗碱血红蛋白检测和PCR/SSCP-PAGE电泳进行相关分析。最后以分子诊断为金标准，计算G7筛查结果的诊断符合率，进行求证和符合度分析。
　　实验用TOSOH公司提供HLC-723G7仪及相关配套试剂，包括层析柱、清洗液、定标和质控品为主体，配合电泳仪、PCR 仪和图像处理系统作为相关分析设备。
　　我们选择来自上海瑞金医院的体检正常志愿者10名，询问无贫血史和溶血家族史；已经用与HLC-723G7同类型仪器检测，HbA1c增高的研究参与者10名（均来自上海瑞金医院）。以病史、临床表现、流行病学调查和血液一般检查，结合张之南主编《血液病诊断与疗效标准》，地中海贫血的患者115名，患者来自广东省妇婴保健院，海南医学院附属医院、上海瑞金医院。以病史、临床表现、流行病学调查、血液一般检查核醋纤薄膜电泳疑为一场血红蛋白病的患者4名，患者来自广东省妇婴保健院、海南医学院附属医院、上海瑞金医院。
　　进入二十世纪九十年代后，国外临床检测中心和红细胞疾病研究中心逐渐以高压液相(HPLC)离子交换层析法， 替代醋纤薄膜电泳和其他凝胶电泳来分析血红蛋白。由于HPLC检测符合ICSH提供的血红蛋白分析参比方法，因此在无条件开展分子诊断或在血红蛋白病高频发区，HPLC完全可以直接用于疾病的最后诊断。但HPLC 仪器使用条件较高，没有在国外广泛展开。尤其在国内，血红蛋白的分析仍依赖醋纤薄膜和其他凝胶电泳。近年，市场上推出了一系列利用HPLC原理制造的快速全自动阳（阴）离子交换层析仪， 对糖化血红蛋白（HbA1c）临床检测作了大量的工作。在此以TOSOH公司最新出品的，由SYSMEX中国总代理的HLC-723G7仪为例，通过不同种类层析柱的应用，介绍一种对血红蛋白中与地中海贫血和部分变异血红蛋白相关的 HbF HbA2 HbD和HbE等德。并将快速筛选检测结果与传统方法、分子诊断方法和临床流行病学结果进行对比，对HLC-723G7 仪在血红蛋白病筛选诊断中的作用做出评估。