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一般认为,正常精子活力应具备以下几点:①排精后30分钟至1小时存活精子率应在65%以上;②排精后6小时活动精子率应为20%;③前向运动分级应在3级以上。临床上将不活动精子增多称为死精子症,而代谢研究显示有时不动的精子并非死精子,而是因为这些精子尾部的微管中缺乏动力臂。
1.精子活率分析 精子活率分析要求抽样准确,取样适量,温度合适,否则会影响检查结果。
取一滴液化并混合均匀的精液滴于载玻片上,加盖玻片后静置片刻即可观察。此项操作宜在25-30℃的环境下进行,温度过低过高都将影响精子的活动,可将显微镜置于用灯泡调节温度的恒温箱内或用自带温度调节的显微镜观察。先用10*10倍视野观察总体精子的活力,再在10*40倍镜下计算100个精子的活率及活力。随机选取10个不同视野,计数100个精子中活动精子的数目,即为精子活率,注意不要选择盖玻片边缘的视野。
为了在精子活率计数时更准确地区分死精子和活精子,可应用染色技术,方法有二:
(1)伊红染色:取一滴精液与等量0.5%伊红混匀后滴于载玻片上,1分钟左右推成薄片,空气中自然干燥片刻。显微镜观察时活精不着色,死精子被染成红色。
(2)苯胺黑伊红染色:取一滴精液及1%伊红一滴混匀,再加两滴10%苯胺黑充分混匀,1分钟后推片,空气中自然干燥。相差显微镜下10*40倍视野观察,活精子呈蓝色,死精子呈黄色;普通光镜下观察,活精子不着色,死精子呈红色。
2.精子活动力分析
精子活动力是精子质量的反映,但也容易受时间、温度、精液液化程度等的影响,因此,在作精子活动力分级评价时,应在恒温箱内进行。用10*40倍显微镜选择4-5个视野,观察并计数100个精子的活动情况,按活动力分级标准计算出各级活动力精子的百分比。正常标准为射精后1小时内前向活跃直线运动精子(JenksⅢ-Ⅳ级)>40%。精子活动力评价方法有二种。
(1)世界卫生组织推荐的方法,把精子活动力分成4级:
0:不活动,无前向运行;
Ⅰ:活动不良,前向运动微弱;
Ⅱ:活动一般,有中等的前向运行;
Ⅲ:活动良好,有活跃的前向运行。
(2)Jenks等将精子活动力分为5级:
0:无活动精子;
Ⅰ:精子尾活动,但不能作前向运动;
Ⅱ:缓慢波浪式前向运动;
Ⅲ:有快速运动,但波浪式运动的精子较多;
Ⅳ:活跃快速的直线运动。
3.精子存活时间 精子存活时间是指射精后精子在体外存活的时间。精子存活时间的测定方法与测定精子活率相同。