精子细胞毒素试验

   

     由于活精子不着色，死精子着染为红色，计算200个精子中，死精子所占的百分数，减去对照组死精子的百分数，即为抗体杀灭精子的百分率。以杀灭精于≥10％以上者为阳性。

　　抗精子抗体与精子结合后，在补体参与下，可导致精子制动和死亡，利用台盼蓝或伊红y等染料使死精子染色，间接验证血清或分泌液中是否有制动精子的抗体存在。
   
     (一)台盼蓝染色法
   
     [准备]
   
     (1)待检血清的分离和灭活补体。
     (2)ab血型人血清(补体)制备。
     (3)2％台盼蓝液配制(用蒸馏水)。
     (4)台盼蓝-生理盐水溶液配制：取适量生理盐水，加等体积2％台盼蓝水溶液，混匀 即可。
     (5)配制0．01 mol／l，ph7.4pbs溶液。
   
     [方法]
   
     (1)取正常新鲜精液[精子浓度为(40～100)x10^6／ml]用ph7.4pbs作l:10稀释，以500r／min 30min离心洗涤一次，弃去上清，沉渣用pbs调整精子浓度为100x10^6／ml的精子悬 液。  
   
     (2)在小试管内加入1滴待检血清，1滴精子悬液和2滴补体血清。置37度孵育，并于30min、60min分别追加2滴补体血清，直至90min后加入1滴台盼蓝生理盐水溶液，继续孵育60min，取出小试管，以500r／min，30min离心，弃去上清，将沉渣涂片，待干燥后镜下观察。以阴性血清作对照组，以同样条件和方法处理。
   
     (3)计数：对照组：记录数至100个无染色精子(活精子)时所需的总精子数(含100个无染色精子加一定数量染色的死精子)。实验组：记录对照组相应的总精子数，把其中所含的无染色精子(活精子)数作x。将100—x所得的数目，即为被检血致死的精子数，这个数月称为精子毒性指数(sti)
   
     (1)sti>25时，p≤0.0l，判为阳性。   
     (2)sti在15-20之间，判为可疑。
     (3)sti<15时，判为阴性。
 
     本法所得阳性率与精子制动试验的阳性率较为一致。
 
     (二)伊红y染色法
 
     [准备]
 
     (1)用蒸馏水配制4％伊红y染液。  
     (2)配制0．01mol／l，ph7.4pbs溶液。   
 
     [方法]
 
     (1)取正常新鲜精液(精子浓度宜大于：60x106／ml)，用ph7．4的pbs洗涤3次，调整精子浓度为10x10^7／ml．
 
     (2)取精子悬液16μl，移置载玻板的漆孔内，分别设2个测定和对照孔，另取待检血清20μl，补体血清4μl加入测定孔内，对照孔只加待测血清不加补体，充分混匀。
 
     (3)把玻板移人湿盒内，在37度孵育30min，每孔加4％伊红y4μl，加上盖玻片使其作用2min，进行镜检。
  
    [判断]