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(5)胚胎移植:阴道及宫颈用生理盐水清洁再用培养液擦洗,将金属或塑料导管置入颈管内。另一助手在显微镜下用1.3mm的聚四氟乙烯管从培养液内吸出胚胎细胞加吸0.03~0.05ml 培养液或0.03~0.05ml受试者血清,将此管插入宫颈管导管内放至距宫底0.5cm处,送胚胎入宫腔。胚胎移植后需卧床24小时,限制活动3~4天,接受黄体酮治疗。移植后2周作β-gcg测定,如无妊娠情况,停用黄体酮。移植成功的妊娠属高危妊娠予以监护。
(4)体外授精:收集精液后应用洗涤法使精液体外获能,然后放入装有卵细胞的培养液内,培养15~24小时,在解剖显微镜下检查,如看到有两个原核存在于卵母细胞原浆中表示已授精,再继续培养36~42小时。当镜下观察到受精卵已分裂至4~8个细胞时,可考虑作胚胎移植。
(3)卵子培养:吸出卵泡液后,立即寻找卵子。取出卵细胞后,置入装有人工培养液的培养皿内,并放入一定量的卵泡液,有助于卵细胞的生长发育。培养时间取决于所取卵泡的成熟度,成熟者一般培养2~6小时。
(2)采卵:在确定的时间采卵。采卵的途径有:①剖腹直视下穿刺卵泡取卵。②经腹腔镜取卵。③b超引导下经腹壁、尿道膀胱或阴道穿刺取卵。目前多采用经腹腔镜或b超指引下经阴道取卵,后者尤为方便。
(1)体外授精前处理及排卵监测:为了适时从卵巢采集排卵前成熟或近成熟的卵母细胞,精确地监测排卵前卵泡成熟的进程极为重要。利用自然月经周期采卵往往只能取到一个卵细胞。为了增加成功的机会,增加发育卵泡以获得多个卵子,现多采用有刺激周期方法(也称促超排卵),一次可取得3个以上的卵母细胞。①自然月经周期中进行排卵前监测:世界上首例试管婴儿成功就是用自然周期监测排卵期排卵的。通过基础体温测定、内分泌测定(血雌二醇值、尿中黄体生成素值)和b超的监测,配合临床观察(宫颈粘液变化等)确定取卵时日。② b超监测:应与内分泌测定密切配合。③促超排卵:目前促超排卵主要有4种方案:克罗米芬—人绝经后促性腺激素(hmg)—绒毛膜促性腺激素(hcg);hmg—hcg;促卵泡激素(fsh)—hcg;促性腺激素释放激素(gnrh)—hmg—hcg。常规使用克罗米芬—hmg—hcg方案。
试管婴儿的操作步骤及程序有以下几方面: