肠出血性大肠杆菌诊断

最近，日本国立预防卫生研究所细菌部渡边治雄博士介绍了肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的检测步骤：收集标本（粪便、食品、小样等）；选择性增菌培养；用免疫磁性玻璃珠捕集肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７；用ＴＣ唱ＳＭＡＣ琼脂培养基分离培养；定性培养、Ｏ抗原鉴定、ＰＣＲ检测；快速确定菌株是否产生Ｖｅｒｏ毒素，可采用ＰＣＲ方法检测。 　　肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７分子生物学检测技术包括基因探针和聚合酶链反应（ＰＣＲ）。基因探针有肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７毒性质粒、ＶＴ１、ＶＴ２和ｅａｅ等探针。其敏感性及特异性好，是鉴定肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７菌株的重要指标。采用肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７不同基因序列设计的引物，进行ＰＣＲ诊断，已用于ＥＨＥＣ的检测与鉴定。
　　５．分子生物学检查
　　（３）酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）：用单克隆抗体ＭＡＢ４Ｅ８Ｃ１２直接进行ＥＬＩＳＡ反应检测肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７显示明显特异性，可用于临床与食品标本检测。近年有人应用快速ＥＬＩＳＡ法直接筛选粪便标本中的肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７。
　　（２）间接血凝试验（ＩＨＡ）：以肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７菌体提取脂多糖（ＬＰＳ），致敏绵羊红细胞制成致敏红细胞悬液，与不同稀释度的灭活患者血清在血凝板上作ＩＨＡ。ＩＨＡ效价≥１∶４０９６时有诊断意义。本法的敏感性和特异性均好，操作简单，有助于肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７患者的诊断。
　　（１）胶乳凝集试验（ＬＡＴ）：以胶乳微粒为载体，用兔抗肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７免疫血清的ＩｇＧ致敏，制备特异性诊断胶乳试剂，用于检查经ＳＭＡＣ平板分离获得的非山梨醇发酵的菌落。若与诊断胶乳呈明显凝集而对照胶乳不凝集时即为阳性。本法与ＳＭＡＣ并用，可对病人粪便和食品标本中的肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７作出快速筛选。
　　４．免疫学检查
　　（３）快速ＭＵＧ试验：９０％的其他大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶，能水解４唱甲基伞形花内酯唱Ｂ唱Ｄ葡萄糖醛酸苷（４唱Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ唱Ｂ唱Ｄ唱Ｇｌｕｃｕ唱ｒｏｎｉｄｅ，ＭＵＧ）产生荧光。检测时挑取纯培养基中的菌落置于含ＭＵＧ试管中４４．５℃培养２０ｍｉｎ，然后在高强度光源下观察结果。产生靛蓝色荧光者为阳性。肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的ＭＵＧ结果与Ｖｅｒｏ毒素的产生有高度一致性。ＭＵＧ试验可以显著提高筛选肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的特异性和细菌经生化反应筛选后，再用Ｏ１５７和Ｈ７抗血清凝集试验进行鉴定。如果条件允许，还应用ＤＮＡ探针技术和ＰＣＲ方法。
　　（２）Ｈ７抗血清唱山梨醇发酵培养基：在特定的含山梨醇的半固体培养基中，按（１∶１０００）～（１∶２０００）加入Ｈ７抗血清，制成Ｈ７抗血清唱山梨醇发酵培养基。肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的Ｈ７抗原被Ｈ７抗血清所抑制，细菌的动力消失。肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７菌株在此培养基上呈现不发酵山梨醇和无动力等特点，本法有助于肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的分离与筛选。
　　（１）山梨醇麦康凯琼脂（ＳＭＡＣ）分离细菌：可将粪便标本接种于山梨醇麦康凯琼脂中进行细菌分离。因肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７不发酵山梨醇，而绝大多数的其他大肠杆菌发酵山梨醇。在用１％山梨醇代替乳糖配制的ＳＭＡＣ培养基上，肠出血性大肠杆菌Ｏ １５７ ：Ｈ ７ 形成无色菌落，而发酵山梨醇的其他大肠杆菌呈粉红色菌落。挑选出不发酵山梨醇的菌落，再经生化与血清学鉴定。
　　镜下可见红斑和水肿，钡剂灌肠显示典型的水肿证据---“拇指征”。 ３．分离肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７菌株
　　白细胞数正常或增高，中性粒细胞核左移。白细胞计数可达（７．６～１９．６）×９９１０ ／Ｌ，平均为（１３～１４）×１０ ／Ｌ。在大量肠道出血或血管内溶血时有贫血表现，血红蛋白及红细胞数均有减少。网织红细胞增多，或可见畸形红细胞及红细胞碎片。血小板减少，尤其是出现血栓性血小板减少性紫癜时更加明显。 ２．乙状结肠镜检和钡剂灌肠
　　１．血常规
　　实验室检查包括血常规、乙状结肠镜检、细菌分离与鉴定、免疫学试验和分子生物学技术等。病例确诊需要从粪便分离出肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７菌株或者肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的急性血清学反应的证据。
　　（二）实验室检查
　　患者出现血性腹泻、腹部绞痛、不发热或低热的典型症状或并发溶血性尿毒综合征、血栓性血小板减少性紫癜，临床上可考虑肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７感染。
　　（一）临床症状和体征
　　肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７感染的诊断需根据病史（对暴发流行而言，群体发病，比较一致的潜伏期）、典型的临床表现（腹泻，特别是血性腹泻以及部分病例出现溶血性尿毒综合征相应的表现）等综合考虑。确定诊断须作实验室检查。
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