胆管癌细胞

观察胃泌素（gastrin）及胆囊收缩素（CCK）对胆管癌细胞浸润转移的 影响 。 方法 用Transwell小室 分析 胃泌素及胆囊收缩素对胆管癌细胞浸润转移能力的影响。并用RT-PCR及Western blot分析经胃泌素及胆囊收缩素刺激后，胆管癌细胞QBC939浸润转移相关分子基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。结果 经胃泌素及CCK作用后，胆管癌细胞浸润转移能力明显增强，胆管癌细胞可能与浸润转移相关分子MMP-2、MMP-9表达增多有关。胆管癌细胞而其受体抑制剂丙谷胺（proglumid）可抑制该作用。结论 胃泌素和胆囊收缩素可促进胆管癌细胞浸润和转移，而丙谷胺可抑制该作用。小室检测胆管癌细胞的体外侵袭力取对数生长期QBC939细胞用 0.25%胰酶消化后，用无血清DMEM培养液洗涤3次，制成单细胞悬液，台盼蓝染色确定细胞成活率，分别用无血清DMEM培养基（对照组）及含1×10-6mol/L的胃泌素（组）、CCK（组）、胃泌素+丙谷胺（组）及CCK+丙谷胺（组）的培养液稀释至5×104 /ml，振荡混匀，备用。将25 μl 1 mg/ml 的Ma-trigel胶分3次均匀涂于Transwell小室的微孔膜上，每次间隔10 min，紫光灯下放置30 min使其胶化。取1室，加入考马斯亮蓝检查有无渗漏。将上述制备的各组细胞悬液75 μl， 分别加入 Transwell 小室中，置入含成纤维细胞培养上清的24孔培养板中，每组设3复孔，胆管癌细胞置入培养箱中培养24 h。擦去小室内侧Matrigel胶及细胞，取下Transwell微孔滤膜在多聚甲醛液的质量分数为5%中固定30 min，常规HE染色。400倍光镜下观光察，随机取5个高倍视野，计数透过膜细胞数。 1.3.2Western blot检测胃泌素及胆囊收缩素及其受体拮抗剂丙谷胺处理后胆管癌细胞基质金属 蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达分组情况及细胞准备同前。收集待测细胞样本，用细胞裂解液充分裂解抽提后，采用Low-ry法蛋白定量。调整各组蛋白浓度，使得样品终浓度为5 mg/ml。置于10%聚丙烯酰胺凝胶上电泳数小时，电转移至PVDF膜上，加上特异性抗体孵育4℃过夜（约12 h）。将膜与HRP标记的第二抗体孵育37 ℃ 2h。经DAB显色后，扫描后于Mias图象分析系统中分析，蛋白含量以Volume值表示